吉姆萨/姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9)

简介：

吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同，常与瑞氏染液联合使用。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

pH对细胞染色有一些影响。细胞里各种成分均不蛋白质，因为蛋白质系两性电解质，带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境里下在电荷增多，易和伊红结合，染色为偏红；在偏三性环境里负电荷增多，易和美蓝或天青结合，染色偏蓝。所以细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片一定清洁，要无酸碱污染。配制顼特液一定用 甲醇，稀释染色一定用缓冲液，冲洗一定用水应近中性，不然可导致各种细胞染色反应异常，以致于识别困难，甚至造成错误的。

吉姆萨/姬姆萨染色液(Giemsa stain, 1:9)主要由进口的吉姆萨/姬姆萨色素通过研磨配制而成，常用于组织切片、血液和细胞涂片、细菌、染色体显带、原生动物寄生虫等染色，能呈现出清晰的细胞染色效果。而Giemsa stain(1:9)的特点在于，由Giemsa stain储存液(10×)和磷酸盐缓冲液组成，1:9混合成工作液后使用；当然也可以分开使用，同样能够得到满意的染色效果。该产品仅适用于科研实验，不可做他用。

主要成分：

试剂(A): 主要由吉姆萨色素、甲醇等组成。

试剂(B): 主要由磷酸盐等组成。

自备材料：

1、 载玻片

2、 蒸馏水或去离子水

3、 甲醇

4、 染色架

5、 显微镜

6、 0.1～0.5%的乙酸

操作步骤（仅供参考）：

(一)一步法涂片染色

1、 Giemsa stain 工作液的配制： 按试剂(A):试剂(B)=1:9混合，即取1份的Giemsa stain储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中充分混匀，即为Giemsa stain工作液。配制后Giemsastain的工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。

2、 常规方法制备血液涂片或涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定1～3 min。

3、 将血液涂片或涂片放置染色架上，滴加Giemsa stain工作液覆盖涂片，室温滴染15～30 min。

4、 用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。

5、 干燥、镜检。

染色结果：

(二)两步法涂片染色

1、 Giemsa stain工作液的配制：按试剂(A):蒸馏水或去离子水=1:4配制Giemsa stain工作液，即取1份的Giemsa stain储存液(10×)加入到4份的蒸馏水或去离子水中充分混匀，即为Giemsa stain工作液。配制后Giemsa stain的工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。

2、 常规方法制备血液涂片或涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定1～3 min。

3、 将血液涂片或涂片放置染色架上，滴加Giemsa stain工作液覆盖涂片，室温滴染10～15 min。

4、 加入等量磷酸盐缓冲液，轻轻晃动载玻片，室温静置5～10 min。

5、 用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。

6、 干燥、镜检。

染色结果：

（三）组织切片染色

1、 Giemsa 工作液的配制：按试剂(A): 试剂(B) =1:9 配制Giemsa stain工作液，即取1份的Giemsa stain 储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中，充分混匀，即为Giemsa stain工作液。配制后的Giemsa stain 工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。

2、 新鲜组织立即置于Regaud固定液固定2天，期间应更换1次固定液。

3、 3%的重铬酸钾固定1天。

4、 流水冲洗16个小时或过夜。

5、 按照常规脱水、包埋。

6、 切片，厚度约为5 um。

7、 常规脱蜡至水。

8、 蒸馏水清洗2次，每次约1 min。

9、 置于含有Giemsa stain工作液的染缸内，浸染18～24 h。

10、 蒸馏水稍微清洗。

11、 0.1～0.5%的乙酸洗1～2 min。

12、 自来水冲洗。

13、 用无水乙醇迅速脱水3次，每次5～10 s。

14、 二甲苯透明。

15、 中性树脂封固。

染色结果：

注意事项：

1、 血液涂片或涂片应厚薄均匀，以免影响染色结果。

2、 涂片染色中Giemsa染色后，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。

3、 如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液的浓度。

4、 Giemsa涂片染色和组织切片染色中，pH值对染色有一定影响，载玻片应清洁、无酸碱污染以免影响染色结果。

5、 染色液在稀释后液面应有金属光泽，表示染液有染色作用，否则染色液可能失效。

6、 Giemsa组织切片染色中，染色后需用大量0.1～0.5%的乙酸急速冲洗，避免浮面沉淀物污染切片后难以洗脱。

7、 0.1～0.5%的冰乙酸分化，常用于Giemsa组织切片染色，如有必要亦可用于细胞涂片。