Rickettsia tsutsugamushi羌虫病立克次氏体探针法荧光定量PCR试剂盒

产品及特点

规格及成分

使用方法

一、稀释PCR 阳性对照（以10E1-10E6 拷贝/μL 这6个10倍稀释度为例）
如果做定性实验，则此步可以跳过。如果做定量实验，则需要稀释阳性对照做标准曲线。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本产品只提供 DNA 片段作为阳性对照。
1.  标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。
2.用带芯枪头分别加入 45μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（ 用带芯枪头，下同）。
3.在 6 号管中加入 5μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照（试剂盒提供），充分震荡 1 分钟， 得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4.换枪头，在 5 号管中加入 5μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5.换枪头，在 4 号管中加入 5μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照（上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上用。
二、样品 DNA 的制备
7.如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是样品制备 PC（样品制备阳性对照），一个是样品制备 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备 PC。另外用水作为样品制备 NC。
8.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记 N+9个PCR 管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于 PCR 阳性对照（用第4号管中的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为描述操作步骤，
10.在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设 置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后 加）：