还原型抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)含量测定试剂盒说明书
测定意义:
AsA 又称维生素 C。AsA 是辅酶、自 由 基 清 除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
测定原理:
在乙酸溶液中,抗坏血酸与固蓝盐 B 反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物,在 吸收波长 420处测定吸光度。
自备仪器和用品:
研钵、冰、低 温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×2 瓶(棕色),4℃避光保存。临用前配制,每瓶加入 7 mL 蒸馏水充分溶解,用不完的试剂 4℃下可保存 3 天。
样品中 AsA 提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);8000g,4℃离心 20min,取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体:直接测定。
AsA 测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 420 nm,蒸馏水调零。
2.在 EP 管中加入下列试剂
混匀,25℃静置 20min,吸取 200μL 加入微量石英比色皿/96 孔板中,420nm 下测定各管吸光值。ΔA=A 测定-A 空白。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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