脲酶(Urease,UE)测定试剂盒说明书
测定意义:
UE 能够水解尿素,产生氨和碳酸。UE 活性与有机物质含量、全氮和 氮含量呈正相关,反应了氮素状况。
测定原理:
利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml 比色皿、研钵、冰、和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,临用前加入 5mL 蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂 4℃保存;
试剂二:液体 12mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三 A 液:液体×1 支,4℃保存;试剂三 B 液:液体×1 瓶,4℃保存;临用前将 A 液倒入 B 液中混合,待用;用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂四:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
样本的前处理:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 578nm,蒸馏水调零。
2、酶促反应
2、将上清液稀释 10 倍(取 0.1mL 上清液,加入 0.9mL 蒸馏水)。
3、测氨量(在 1ml 比色皿中加入下列试剂)