土壤谷氨酰胺酶(S-GLS)测试盒/微量法说明书
注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GLS(EC 3.5.1.2)存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调 节 游 离 氨 量 和 尿 素 代 谢。
测定原理:
S-GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨,利用奈氏试剂检测氨增加的速率,即可计算其酶活性。
需自备仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵、甲苯、冰和双蒸水。
试剂组成和配制:
试剂一×1 瓶,15 mL,4 ℃保存;
试剂二×1 瓶,40 mL,4 ℃保存;
试剂三×1 瓶,60 mL,常温保存;
试剂四×1 瓶,5 mL,常温保存;
试剂五×1 瓶,3 mL,常温保存;
试剂六×1瓶,3 mL,常温避光保存。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 420nm,蒸馏水调零。
2、样品测定(在 EP 管中加入下列试剂):
振荡混匀,室温放置 15min
混匀,8000 g,25℃离心 10 min;取上清液,依次加入下列试剂
混匀,室温静置 15min,420nm 处读取测定管和对照管吸光值,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。
注意:试剂六如出现沉淀,静置后取上清使用。
酶活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 3.8488x+0.0057;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值 A。
单位定义:每 g 土样每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS(nmol/min/g 土样)=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反总÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。
V 反总:反应体系总体积:1.05mL;T:反应时间,2h=120min;W:样本质量,g; 1000,μmol 到 nmol 换算系数。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 1.9244x+0.0057;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值 A。
单位定义:每 g 土样每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。
S-GLS(nmol/min/g 土样)=(ΔA-0.0057)÷1.9244×V 反总÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W。
V 反总:反应体系总体积:0.525mL;T:反应时间,2h=120min;W:样本质量,g; 1000,μmol 到 nmol 换算系数。
本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
...