RIPA裂解液(M)/RIPA裂解液(中)

RIPA Lysis Buffer

规格和包装：
保存方法： -20oC 保存，一年有效。
使用说明：
根据使用量，取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
注意事项：
1、 因 SDS 在低温易析出，如发现 RIPA 有沉淀，请先使其恢复室温，沉淀即可溶解。
2、 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
3、 裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用 Bradford 法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的 BCA 蛋白定量试剂盒（编号 C05-02001）测定蛋白浓度。