产品规格:100ml

保存条件:-20℃避光保存，有效期 12 个月。

简介：

NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 和 co-IP 等。
NP-40 裂解液主要由 NP-40、氯化钠、Tris 组成，NP-40 为最常用的去污剂之一。用本裂解液得到的蛋白样品，可以用 BCA Protein Assay Kit (C05-02001)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。本产品含有一支 1.5ml PMSF。
本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断。
使用方法：
(一) 贴壁培养细胞
1. 取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，加入 PMSF 使终浓度为 1mM。
2. 去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 NP-40 LysisBuffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置冰上或4℃裂解15～30min。
4. 4℃离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
5. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二) 悬浮培养细胞
1. 取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，加入 PMSF 使终浓度为 1mM。低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
2. 用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～200μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 NP-40 Lysis Buffer 。
3. 4℃离心 5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。
4. 进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三) 组织样本
1. 取 NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，加入 PMSF 使终浓度为 1mM。把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
2. 取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在 4℃之内，以减少蛋白的降解。
3. 按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上4℃裂解。
4. 4℃离心（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
5. 进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1. 在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
2. 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3. 在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。
4. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈震荡使样品裂解充分。
5. 溶解 NP-40 Lysis Buffer 时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。
6. 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附表（贴心小助手）：各种裂解液的主要特点和差异

本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。