中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白简介:
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)又名Lipocalin2,属于lipocalin结合蛋白家族,也是中性粒细胞的中性粒颗粒的组成部分, NGAL由178个氨基酸残基组成的单体,其分子量大小为25kD。NGAL既能够自身聚合形成同源二聚体,也能够与MMP-9聚合形成异源二聚体。成熟的小鼠Lipocalin-2与人的和大鼠的Lipocalin-2分别有62%和81%的同源性。
NGAL在细胞分化、肿 瘤形成以及细胞凋亡等过程中都有一定的作用。NGAL是促进多种细胞的生长、分化的重要因子,同时也是一个有效的抑菌剂。体内和体外实验表明,NGAL能够通过诱导Ras的活性控制Ras通路,从而将上皮细胞改造成间充质,影响乳 腺 肿 瘤细胞的侵袭和转移行为。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中NGAL的浓度。NGAL捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的MMP-9会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗NGAL抗体后,抗NGAL抗体与NGAL接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。 加入显色剂,若样本中存在NGAL将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,NGAL浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中NGAL浓度。
NGAL参考标准曲线
注意:本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度,特异性和重复性:
1.灵敏度:多次重复结果表明,最小检出量为7.9pg/ml。
2.特异性:与人Lipocalin-2、Lipocalin-1及大鼠的Lipocalin-2等均没有交叉反应。
3.重复性:板内,板间变异系数均<10%.
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