pYES2（INVSc1）酵母表达培养基套装+（含LB等）
英文名：pYES2(INVSc1) Yeast Expression Media plus Kit
储存条件:请按产品包装要求储存。
产品组成:
产品说明:
1. 感受态细胞和氨苄青霉素请-80°C储存，干冰运输。其余产品可常温或蓝冰运输。
2. SD和SG系列的产品，请在500mL的蒸馏水中，加入一包干粉，搅拌混匀后，于1159C灭菌20min后使用。
3. LB肉汤，请在500mL的蒸馏水中，加入-包干粉，搅拌混匀后，于115°C灭菌20min后使用。
4. LB琼脂，请在250mL的蒸馏水中，加入- -包干粉，搅拌混匀后，于1159C灭菌20min后使用。
产品简介:
本产品用于酿酒酵母蛋白表达实验，可制备诱导培养基平板25块，诱导液体培养基500mL。如需获得大量诱导表达产物，诱导培养基可以单独订购。
套装YM4000包含酵母转化、筛选、诱导所选的全部试剂，均为即用型或者预混型，使用方便，不会造成资源浪费。
套装YM4001在YM4000基础上，增加了克隆感受态细胞以及大肠杆菌培养，筛选试剂，使用方便，省去多次感受态购买运输的费用。
使用说明(仅供参考): .
- -、蛋白表达载体构建
1.将目的蛋白克隆到pYES2载体(多克隆位点请参照图谱序列)。
2.将重组载体转化到大肠杆菌感受态细胞中(参照TOP10F'感受态细胞使用说明书)。
3.用含氨苄(50-100ug/mL) 的LB平板筛选转化产物。
4.挑选10-20个克隆，PCR 并测序验证，筛选阳性克隆。
5.用含氨苄(50-100ug/mL)的LB培养基摇菌，用15%-25%甘油保存阳性菌。
6.利用碱裂解法提取质粒，备用。
二、重组载体酵母菌转化
1.将重组载体转入INVScl感受态细胞( 参照INVScl感受态细胞使用说明书)。
2.转化产物涂布SD/-Ura平板，30C培养3-5天，筛选阳性克隆。
3.将阳性克隆，用无菌生理盐水重悬后，划线或者涂布于SG/-Ura平板，30°C培养3-5天。
4.如SG/-Ura平板生长过慢，可加入1%的棉子糖，葡萄糖会抑制GALI启动子的转录，抑制半乳糖的利用率，棉子糖不会。棉子糖可以提高酵母在诱导培养基中的生长速度。
三、蛋白诱导表达
1. SD或SG培养筛选出来的阳性克隆，接种到15mL的SD/-Ura液体培养基中，30°C摇床过夜培养。
2.于49C 1,500g 离心5min， 去除上清。
3.用50mL的SG/-Ura液体培养基重悬细胞沉淀，于30°C摇床培养。
4.离心去上清，冷冻保存或直接用于蛋白提取。
临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。
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