酵母基因组菌落PCR试剂盒(单杂诱饵检测)
英文名:Yeast genome colony PCR Kit
保存条件: -20℃储存, 未开封有效期24个月。
包装内容:
产品说明:
本品用于酵母单杂pAbAi质粒重组基因组后的PCR鉴定。无需提取基因组等繁琐的操作步骤,菌落经快速裂解液简单处理后即可作为PCR模板使用。仅需高保真PCR Mix以及Y1H引物混合物,再无需其它试剂,便可快速高效完成PCR扩增,产物可用于测序分析。本试剂盒提供的YIH引物混合物(未公开序列)扩增空载pAbAi重组Y1HgGold的产物为1346 bp。测序可以用pAbAiF(GCTCCTTCCTTCGTTCTTCCTTC),或者插入片段的特异性引物。
操作步骤:
1. 准备PCR预混液:根据检测克隆数,等比例扩大配制体积。
2. 吸取5 μL酵母快速裂解液加入PCR管中。
3.用无菌牙签或10 μL枪头刮取少量酵母菌落(直径1-2 mm,刮取1/4即可)悬浮在裂解液中。
4.吹打或者震荡混匀后PCR仪98°C裂解5 min,即为裂解产物。
5. 在裂解产物中加入45 uL PCR预混液(含引物),PCR扩增。
6. 取5 μL PCR产物进行电泳检测。.
注意事项:
1.菌落PCR前,先刮取部分菌落保存,可以有效避免样品污染和丢失。
2.新鲜菌落的PCR成功率极高。如生长期较长的菌落,请先进行预实验。
3.如果扩增失败或者弥散,可以增加菌体用量到整个菌落,但是需要在操作步骤4 (98°C裂解5 min)之后,7,000 rpm离心2 min后取上清做模板。
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