英文名:LacZ extracellular Expression color rendering Kit
保存条件:常温保存,X-Gal 储存液-20℃保存,有效期一年。
产品内容:
产品介绍:
本试剂盒用于 EGY48 酵母杂交系统中,LacZ 报告基因的检测;当有互作发生,LacZ 报告基因表达,生成β-半乳糖苷酶,将 X-Gal 切割成半乳糖和深蓝色的底物 5-溴-4 氯靛蓝。
筛选培养基配制:(SD/-Trp/-Ura 平板)
1. 请将 0.5 L 的 SD/-Trp/-Ura with Agar 干粉,加入 500mL 的蒸馏水中,搅拌溶解;
2. 115 ℃灭菌 20 min,冷却后倒板;
注意:灭菌的培养基如有剩余,可置于超净台密封保存,再次使用时微波加热溶解后倒板即可。显色培养基配制:(SD/-Trp/-Ura/Gal/Raf/X-Gal 平板)
1. 组分配比,见下表;
2. 根据需要按照上表称取适量 SC/-Trp/-Ura Broth 和 Agar,加水至 75ml 搅拌溶解;
3. 115 ℃灭菌 20 min;同时预热 20%半乳糖溶液、20%棉子糖溶液、10×BU buffer 至 55 ℃左右;
4. 培养基冷却到 55 ℃左右后加入预热的上述成分以及 X-gal 储存液,混匀倒板。
注意: 显色平板请尽快使用。3 天内避光 4 ℃保存的板子亦可以使用。
实验方法:(以 EGY48-pLacZi 酵母单杂交体系为例)
1. 载体构建 pLacZi-X & pB42AD-Y;
2. 载体共转化 EGY48 酵母感受态细胞(参照 SK2400 使用说明);
3. 转化产物涂布 SD/-Trp/-Ura with Agar 平板,28-30 ℃培养 3-5 天;
4. 随机选择 5 个单菌落,Marker 笔做好标记,挑取少量菌落做阳性克隆检测(参照 SK2420 使用说明);
5. 挑取鉴定为阳性克隆的菌落涂布 SD/-Trp/-Ura/Gal/Raf/X-Gal with Agar 显色平板,28-30 ℃培养 3-5天后观察显色反应。