英文名:X-α-gal Solution(20mg/ml)
储存条件:-20 ℃避光储存,未开封有效期 12 个月。
包装内容:
产品说明:
X-α-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-吡喃半乳糖苷)是α-半乳糖苷酶(MEL1)的显色反应底物,更为常见的 X-Gal 是β-半乳糖苷酶(LacZ)的显色反应底物。α-半乳糖苷酶可水解无色的 X-α-Gal 底物,并生成蓝色的产物。通过肉眼可见的蓝白斑筛选,可快速而简便的识别阳性克隆。
MEL1 是 GAL4 酵母双杂交系统的一个报告基因,编码外泌型的α-半乳糖苷酶。如果蛋白无互作,报告基因 MEL1 不表达,菌落呈乳白色;如果蛋白发生互作,报告基因 MEL1 表达,菌落呈蓝色,亦可根据菌落蓝色深浅,初步判断蛋白互作强度。
X-α-Gal 与缺陷型筛选平板同时使用,可有效提高筛选效率,排除假阳性克隆,主要应用于酵母双杂交实验 GAL4 酵母表达系统中蛋白互做的阳性克隆的检测。也可用于筛选含α-半乳糖苷酶基因细菌菌株;区分肠杆菌科内的不同菌种,以及区分双歧杆菌和乳酸菌;组织化学中用于酶活性的检测等。
母液配制:
X-α-Gal 母液(20 mg/mL):取 20 mg X-α-Gal 溶于 1 mL DMF,或等比例放大,过滤除菌。
使用方法:
涂布于预制平板:
1. 临用前用 X-α-Gal 稀释液(也可以用 DMF)稀释 X-α-Gal 母液至 4 mg/mL。(请于超净台无菌操作,按需稀释,稀释后的 X-α-Gal 勿久存)
2. 涂布 200 μL(φ15 cm) 或者 100 μL(φ10 cm)X-α-Gal 储存液于预制平板上;
3. 置于超净台或者 37 ℃培养箱至液体被吸收(可以置于超净台避光过夜晾干);
4. 将转化细菌或酵母涂于平板上,于 37 ℃或 30 ℃培养直至蓝色菌斑出现。
直接加入培养基:
1. 将已灭菌固体培养基冷却至 50-55 ℃;
2. 100 mL 固体培养基加入 100-200 μL X-α-Gal 母液混匀,快速倒平板。
携带 MEL1 基因的酵母菌株:
Y2HGold、Y190、AH109、Y187、PG69-2A。
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