酵母阳性克隆快速检测试剂盒(筛库)
英文名:Quick Yeast positive clone assay Kit
储存条件:-20℃储存,未开封有效期24个月。
包装内容:
产品说明:
本产品用于酵母转化或者文库筛选后菌落PCR鉴定。无需提取质粒等繁琐的操作步骤,菌落经快速裂解液简单处理后即可作为PCR模板使用。本试剂盒提供的酵母专用高保真PCRMix (1x),和AD引物混合物,可快速而高效完成PCR扩增,产物可用于测序分析,测序可以用T7,或者插入片段的特异性引物。
AD引物混合物序列如下:
5'AD: CTATTCGATGATGAAGATACCCC
3'AD: GTGAACTTGCGGGGTTTTTCAG
操作步骤:
1. 准备PCR预混液:根据检测克隆数,等比例扩大配制体积。
2.吸取5μL酵母快速裂解液加入PCR管中。
3.用无菌牙签或10 μuL枪头刮取少量酵母菌落(直径1-2 mm,刮取1/4即可)悬浮在裂解液中。
4.吹打或者震荡混匀后PCR仪989C裂解5 min,即为裂解产物。
5. 在裂解产物中加入45 μL PCR预混液(含引物),进行PCR扩增。
PCR反应条件:
6. 取5 μLPCR产物进行电泳检测。
注意:
1.建议先取3-5个克隆进行预实验后再进行批量实验。
2.如预实验失败,将上述第4步得到的裂解产物7,000 rpm离心1 min后取上清加入45 μL PCR预混液中,可有效提高PCR效率。
3.本产品同样适用于菌液PCR。
1)请将10-20 μL菌液离心后的沉淀中,加入10 μL酵母快速裂解液;
2)吹打或者震荡混匀后PCR仪98°C裂解5min;
3)7,000rpm离心1min后取上清5L加入45μuLPCR预混液中即可。
4.部分样品经过多次PCR都无法检测成功。建议用一步法酵母质粒提取试剂盒(PE055 )提取(约需30 min),再进行PCR扩增。
临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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