英文名:Yeast Total Protein Extraction Kit
储存条件: RT ,未开封可保存 24 个月。
产品内容:
产品介绍:
本产品通过使用玻璃珠震荡法,结合化学裂解法破碎酵母细胞壁,适用于多种酵母菌的培养物(包括菌液或平板菌落)。提取的酵母总蛋白可用于SDS-PAGE凝胶电泳及免疫印迹( Westemn Blot) 实验。本产品提取蛋白为变性蛋白,不能用于蛋白活性检测等相关实验。
准备步骤:
将提取液成分II全部加到提取液成分I中,充分混匀作为提取液备用,未用部分-20。C冻存。
操作步骤:
1. 5,000 mp, 4 °C离心5 min收集酵母菌液细胞沉淀(酵母菌液OD值0.5-2.0) 。
2.加入1mL洗涤液震荡混匀,5,000mp,4°C离心5min沉淀酵母细胞,弃上清。
3. 用100 μL提取液悬浮酵母细胞,并快速转移到1.5 mL离心管中,95-100。C金属浴或水浴3 min.
4. 加入0.2g玻璃珠,旋涡震荡器上剧烈震荡5-10 min.
5.用移液器或者巴斯德吸管回收提取液。
6. 剩余玻璃珠的离心管中再次加入100 μuL提取液,稍加震荡,再次回收提取液。
7. 合并两次提取液即为酵母总蛋白样品。
8. (可选步骤) 12,000 mp, 4 °C离心15 min, 上清含可溶性蛋白质,沉淀含不溶性蛋白质。
9.总蛋白样品于95-100 °C金属浴或水浴1 min, 可直接用于SDS-PAGE电泳(无需添加Loading buffer) 。