RCA滚环扩增试剂盒

描述：

滚环扩增（rolling circle amplification，RCA）是新近发展起来的一种恒温核酸扩增方法。以环状 DNA 为模板，通过一个短的 DNA 引物（与部分环状模板互补），在 phi29 DNA 聚合酶催化下将dNTPs转变成单链DNA，此单链DNA包含成百上千个重复的模板互补片段。这种方法不仅可以直接扩增 DNA 和 RNA，还可以实现对靶核酸的信号放大，灵敏度达到一个拷贝的核酸分子。
本试剂盒配备的 RCA Mix 预混合液，使用方便，简化了操作步骤，RCA Mix 为 4X 浓度，内含 Equi-phi29 DNAPolymerase、dNTP Mix、无机焦磷酸酶等。试剂盒配备的Random Hexamers 为 6 碱基随机引物可对目标分子进行指数放大（通常放大 10000 倍），特殊的实验可自行搭配相关引物。

操作方法
1. 配制引物模板退火体系

注意：在不同的实验类型中，Oligo根据实验需要自行选择。
2. 引物和模板退火：体系配制完毕后，放置到 PCR 仪中，95℃ 3min，25℃ 3min。
3. 退火完毕后，向退火产物中加入 5μl 的 4xRCA Mix，混合均匀。
4. 扩增反应
4.1 恒温扩增
对于环状DNA模板采用恒温反应作为推荐使用30℃恒温扩增，30℃孵育 6-16h.该酶在 30-42℃条件下均可工作，必要时根据实验类型进行调整。
4.2 变温扩增
对于基因组 DNA 或 cDNA 模板，推荐使用变温扩增反应，以在短时间内获得更高产量，并提高了低浓度模板的扩增产量。在 PCR 仪上做如下设置：
【30℃ 5min；42℃ 15s】循环 72 次（约 6h）或 120次（约 10h）.
必要时，反应结束后，可于 65°C 10min 进行失活反应。
注意：
RCA 扩增还可应用于其它缺刻或诊断相应的实验，此时Random Hexamer 为非必须品。