RAPA3G Probe qPCR MasterMix(with UDG)
描述:
RAPA3G Probe qPCR MasterMix 将热启动 RAPA3G DNA 聚合酶、反应 Buffer、dNTP 染料等试剂预混在一起,是一种 2×浓度的单组分预混试剂。该制品不含有 ROX 校正染料,适用于各种荧光标记探针,并且适用于各种定量 PCR机型。优化的反应缓冲液,使得该制品可用于单重及多重的探针法定量 PCR。
制品中的 RAPA3G DNA 聚合酶为第三代 DNA 聚合酶,其具有 的杂质耐受性,其对乙醇、胍盐、肝素、血清、植物多糖多酚具有极高的耐受性,因此可用于粗样品的直接定量 PCR 检测(Direct PCR)。该酶经化学法修饰,在 50℃以下 无活性,只有 95 度条件下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性 PCR 扩增,极大的提高了 PCR 扩增特异性。
由于 RAPA3G DNA 聚合酶对 dUTP 具有极强的识别能力,该制品中的 dTTP 核酸碱基完全被 dUTP 所取代,因此扩增产物均包含 dUTP,在配合热敏 UDG(该酶在 95℃热变性 5min 后不可逆失活,不影响后续 PCR 反应)的条件下能达到 的防污染能力。在 10e5 copies 污染物的测试条件下,Ct 推迟 15 个以上(污染去除能力>99.997%)。
2. 进行 Real-Time PCR 反应,通常采用两步法,程序如下:
3. 在多数情况下,采用两步法程序可获得理想的扩增效果,在无法达到预期理想效果的情况下,也可采用三步法 PCR程序,程序如下:
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