Klenow Fragment(exo-)
描述:
Klenow 片段(3′→5′ exo-)是 DNA 聚合酶 I 的 N末端截短物,它保留了 DNA 聚合酶活性,但失去了 5′→3′核酸外切酶活性。该酶进一步经突变去除了其 3′→5′的核酸外切酶活性。因此该 DNA 聚合酶无任何外切酶活性,仅包含了 DNA 聚合酶活性,广泛用于标记探针制备、cDNA 条链的合成等建库试验。
组分
单位定义
一个活力单位即在 37°C 条件下,30 分钟内催化 10 nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。该酶保存液中含有 50%甘油。
10×Klenow Buffer: 500 mM Tris-HCl (pH 8.0 at 25 °C), 50 mM MgCl2, 10 mM DTT. 该酶兼容 PCR Buffer 和内切酶Buffer。
应用:
(1)用随机引物制备探针
(2)随机引物法标记
(3)cDNA 条链的合成
(4)该酶不能用于产物平端不齐
失活:
75°C,20min 失活。
储存:-20℃可保存 3 年。
37°C 反应 15min,75°C 20min 失活。
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