Hi T7 RNA Polymerase

描述：

Hi T7 RNA Polymerase 对 T7 噬菌体启动子具有高度的特异性，并可以其作为启动子，DNA 作为模板体外合成正义链。双链线性质粒 DNA、PCR 产物均可作为该酶的底物模板。

Hi T7 RNA 聚合酶经电子重构架及库筛选，与 Wild型比较来看，酶的 DNA 模板结合区域亲和力更高，使其
具有持续合成能力，从而获得更高的产量，并易于长片段RNA 的合成。该酶为重组纯化制品，无 DNase 和 RNase污染。

组分

活性定义：在标准反应体系下，37℃ 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位。
储存：置于-20°C 可保存 2 年，如有白色沉淀析出，37°C温浴 5min 后使用，不影响性能。
热失活：75°C，10min。

2. 37℃孵育 2-3h (通常 3h，即可获得>80 μg 的总产量)。
3. 反应完毕后，如需去除模板 DNA，加入 Dnase I（2U）37℃处理 15min。
4. 终止反应：75℃加热 10min，或加入 2 μl 0.5M 的 EDTA(pH8.0)。
注意事项
1.质粒DNA的质量影响RNA的量和完整性。质粒DNA的浓度越高，生成RNA的质量越高，质粒模板DNA应该无RNase污染.
2.该酶为高产酶，RNA 产量极高，在反应完毕后，通常存在肉眼可见的浑浊状态，其为反应副产物焦磷酸镁，此时表明反应剧烈。在下一步 RNA 纯化前，可通过短暂离心去除沉淀物，此过程并不丢失 RNA。
3. 通常转录后 RNA 产物浓度在 2-4 μg/μl，因此电泳时，仅需取 0.05-0.1 μl 即可。
4. 关于 T7 启动子序列：（G/C）标示 G 或 C 碱基均可。