ThermoStable V Reverse Transcriptase (无甘油)
描述:
ThermoStable V Reverse Transcriptase 反转录酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该酶去除了 RNase H 活性中,从而避免反转录过程中降解 RNA。同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强(最佳活性温度 55℃),该酶在 65°C 条件下仍然有部分活性。
相比于低温条件下反转录反应,采用高温反转录可显著打开RNA 二级结构,从而提高复杂 RNA 模板的扩增性能、提高反转录 cDNA 的长度和产量,从而提高后续检测的灵敏度。
注意:ThermoStable V RTase 制品中不含有甘油。
酶储存液:10mM Tris-HCl,pH7.5,150mM NaCl, 2mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.02% Tween20,15%海藻糖。
单位定义:以 poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物,在 37°C条件下,10 分钟内催化 1 nmol 的 dTTP 掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为一个活性单位。
储存:-20°C 可保存 1 年,-80°C 可保存 3 年,短期使用于4°C 保存(1 个月)。该制品反复冻融 10 次,不影响性能。
推荐的反转录温度设置为 55°C,无论是高 GC 或长片段模板,均可获得综合性的 cDNA 产量。
3. 反转录所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反应或储存于-20°C。
4. 其它注意事项:该酶可与 Taq DNA 聚合酶组合,用于One-Step RT-PCR,推荐的 RT 温度为 55-60°C,RT 时间为 5min,酶的参考用量为:终反应浓度 0.5-2U/ul。