T4 RNA 连接酶1
描述:
催化 3’→5’磷酸二酯键的形成,使核苷酸的 5’-磷酸末端和 3’-羟基末端连接,伴随着 ATP 水解为 AMP 和 PPi。作用底物包括单链 RNA、DNA 及二核苷焦磷酸,它可催化ssDNA 和 RNA 的连接,相对于 ssDNA,该酶对 RNA 分子的连接和环化效率更高。
应用
连接单链 RNA 和 DNA
RNA 3’末端标记
RNA 和 DNA 分子内和分子间连接
合成单链寡脱氧核苷酸
蛋白质中掺入非天然氨基酸
储存:-20℃可保存 3 年。
活性定义:1 单位指在 1×T4 RNA Ligase Buffer 中,37℃条件下,30 分钟内将 1nmol 的 5’-[
32P]rA16 转化为磷酸盐不溶物质所需要的酶量。
使用注意事项
(1)1×T4 RNA Ligase Buffer:50 mM Tris-HCl pH 7.5,10 mM MgCl2,1 mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度 1mM ATP。
(2) 反应温度 37℃,65℃ 10min 可使该酶失活。
(3)该酶的连接底物无论是 ssDNA 还是 ssRNA 均需要 5’-磷酸化或预腺苷化。
(4)该酶不能连接双链 DNA 或 RNA。
(5)加入终浓度 5~10% PEG 8000 或增加孵育时间可提高连接效率。
临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。