DNA/RNA Adenylatase
描述:
DNA/RNA Adenylatase 为 全新升级的腺苷化酶,该酶能高效的将 ssDNA 或 ssRNA 的 5’磷酸基团腺苷化(该酶是已知的 效率的腺苷化酶)。通常该酶能将>95%的磷酸化 DNA 转化成腺苷化 DNA(AppDNA)。该酶极度耐热,在 60-95 度下均有活性,高温下的腺苷化反应有利于 DNA/RNA 的链舒展,提升底物的腺苷化比例,并允许一些特殊的实验开展,如 NGS 片段化后的腺苷化反应。
组分
储存:-20℃ 可保存 3 年。
注意:(1) 1×Adenylatase Buffer:15 mM HEPES, 5 mM Mg2+, 4 mM DTT,pH 7.5。(2)该酶不可通过加热失活。
使用方法
1 配制如下反应体系:
75°C 孵育 60min。
2 加入 10mM 的 EDTA 进行终止反应。
使用注意事项
(1)该酶对底物进行腺苷化时,严格控制酶与底物的摩尔比例,酶:底物比例>2,但不宜超过 5,推荐的比例为 2:1。
(2)反应温度,该酶 反应温度为 75-80℃,但在 65-95度均有活性,在 95℃下仍然具有>40%的活性。必要时可自行调整。
(3)该酶依赖 Mg2+进行反应,在 2-10mM 条件下均可。
(4)该酶依赖 ATP 进行反应,在 0.2-0.5mM 条件下均可,必要时可自行调整,在低于 0.1mM 条件下,腺苷化效率将大幅下降,甚至不反应。
(5)关于底物,该酶对 ssDNA 或 ssRNA 底物均可腺苷化,两者无差异。
(6)关于反应 pH,由于腺苷化产物在高 pH 条件下不稳定
(>8.5),推荐的反应 pH 为 7.0-8.0.
(7)由于反应温度较高,在小体积实验时,应防止蒸发导致体系变化,可采用矿物油进行封闭处理。
(8)在低浓度底物的腺苷化反应时,推荐缩小体积,而不是降 低 反 应 物的 浓 度,以获得 效率的腺苷化。
临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。
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