SUMO 蛋白酶
描述:
SUMO 蛋白酶,也称为 UIP 蛋白酶(分子量 26kD),是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶。SUMO 蛋白酶以一种非常特异的方式切割蛋白,它特异性识别 UBL 蛋白的三级结构-SUMO,而不是氨基酸序列,故该蛋白酶可以切割重组融合蛋白的 SUMO。切割的 温度为 30°C,该酶作用温度和 PH 范围(pH7-9)都比较广泛。酶切后,可通过Ni-NTA Resin 亲和纯化很容易地将 SUMO 去除。SUMO 蛋白酶是自 E.coli 表达经亲和纯化的重组蛋白酶。
组分
活性定义:在 1×SUMO Protease Buffer-Salt (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.2% NP-40, 1 mM DTT)中,30°C 反应
1h,剪切>85%的 2 μg 对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
应用:融合蛋白标签剪切去除。
储存:SUMO 蛋白酶置于-70°C 可保存 2 年;-20°C 可保存6 个月,避免反复冻融;10×SUMO Buffer 置于-20°C 保存即可。
操作方法
若蛋白为热不稳定性,请在 4°C 孵育较长时间或增加酶的用量。
1. 在 EP 管中配制如下反应体系
2. 混匀上述体系后于 30°C 孵育,在 1、2、4、6 小时分别吸出 30 μl 上述反应液,置于单独的 EP 管中。
3. 向上述 EP 管中加入 20 μl 2×SDS Loading Buffer, 置于-20°C。
4. 取 30 μl 样品进行 SDA-PAGE 分析。
注意事项
为达到 的酶切效果,请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白,SUMO 蛋白酶所需 NaCl 的浓度不同的蛋白情况会有所差别,可根据实际情况在0~300 mM 之间调节 NaCl 的浓度以达到 的效果。
临床诊断。严禁用于临床医疗及其他非科研用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。